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科普知識
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分光光度計

熒光分光光度計測試步驟

發(fā)布日期:2022-10-09 點擊率:82

  如何正確使用熒光分光光度計來進行測試呢?以下為您詳述:

  熒光分光光度計測試步驟

  (一)樣品準備

  1.液體樣品根據(jù)用戶提供的技術(shù)指標,檢查濃度范圍是否合適,如果需要稀釋,則要考慮所需溶劑類型和稀釋倍數(shù)。

  2.固體樣品均勻粉末、片狀或具有光滑平面的塊狀樣品,均可直接測定。

  (二)操作步驟

  1.開機:接通電源,打開主機開關(guān),點燃(打開)光源后,根據(jù)說明書要求啟動計算機。

  2.檢測前準備:參照儀器說明書,在20天內(nèi)至少進行一次激發(fā)校準和發(fā)射校準,檢測前儀器應(yīng)預(yù)熱。

  3.工作條件的選擇:環(huán)境溫度應(yīng)在20℃±5℃;相對濕度不大于70%;電源穩(wěn)定,無磁場、電場干擾。根據(jù)樣品的特性及熒光強度,選擇合適的儀器工作條件(如狹縫、PM增益、響應(yīng)時間等)。

  4.基本測定

  (1)熒光激發(fā)光譜測定

  設(shè)置儀器參數(shù),掃描發(fā)射波長,找到maxλem,以此為發(fā)射波長,記錄發(fā)射強度作為激發(fā)波長的函數(shù),便得到激發(fā)光譜。

  (2)熒光發(fā)射光譜測定

  設(shè)置儀器參數(shù),掃描激發(fā)波長,找到maxλex,以此為激發(fā)波長,記錄發(fā)射強度與發(fā)射波長間的函數(shù)關(guān)系,便得到熒光發(fā)射光譜。

  (3)差譜測定

  設(shè)置儀器參數(shù),選擇合適的工作方式,測定背景溶液的發(fā)射光譜并儲存起來,在一定的工作方式下,掃描樣品溶液的發(fā)射波長,得到當(dāng)時的光度值和儲存的背景值之間的差示值,即差譜。

  (4)峰面積積分

  選擇適當(dāng)?shù)墓ぷ鞣绞剑瑢悠啡芤哼M行積分操作,即得到峰面積積分。

  (5)熒光強度

  選擇合適的測量參數(shù),設(shè)置λex、λem,采用定點讀數(shù)或掃描方式,即可測得所選波長處的熒光強度。

  (6)定量測定

  配制一系列已知濃度的標準溶液,在一定的測定條件下,設(shè)置λex、λem,按照由稀至濃的次序,測定標準溶液的熒光強度,繪制熒光強度—濃度的工作曲線,不改變儀器參數(shù)測定未知溶液的熒光強度,由工作曲線即可求出未知溶液的濃度。

  (三)分析結(jié)果的表述

  1.熒光激發(fā)光譜、發(fā)射光譜以及其他光譜由儀器控制電腦直接繪出。

  2.峰面積積分、熒光強度由儀器控制電腦計算顯示。

  3.定量測試:在相同的測定條件下,測定一系列已知濃度的標準溶液的熒光強度,繪制出熒光強度-濃度的工作曲線。濃度未知的溶液的熒光強度測定后,由工作曲線求出該溶液的濃度。

  熒光分光光度計使用注意事項

  1.在實驗開始前,應(yīng)提前打開儀器預(yù)熱,并配制好所需的溶液,對于已經(jīng)配制好的溶液,在不用時放在4℃冰箱中保存,放置時間超過一星期的溶液要重新配制。

  2.實驗所用的樣品池是四面透光的石英池,拿取的時候用手指掐住池體的上角部,不能接觸到四個面,清洗樣品池后應(yīng)用擦鏡紙對其四個面進行輕輕擦拭。

  3.在測試樣品時,注意熒光強度范圍的設(shè)定不要太高,以免測得的熒光強度超過儀器的測定上限。

  4.實驗結(jié)束后,要及時的清理臺面,處理廢液,清洗和放置好樣品池,將下次要用的溶液放回冰箱,并且按規(guī)定登記實驗記錄,養(yǎng)成良好的實驗習(xí)慣。

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