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粒度儀

液相色譜儀的操作與基線問(wèn)題處理

發(fā)布日期:2022-05-30 點(diǎn)擊率:89

    高效液相色譜儀適宜于分離、分析高沸點(diǎn)、熱穩(wěn)定性差、有生理活性及相對(duì)分子量比較大的物質(zhì),因而廣泛為化學(xué)、醫(yī)學(xué)、工業(yè)、農(nóng)學(xué)、商檢和法檢等學(xué)科領(lǐng)域中針對(duì)這種精密而又運(yùn)用廣泛的科學(xué)儀器。

 

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    下面我們來(lái)聊一聊基線。HPLC常見(jiàn)的基線問(wèn)題主要有基線漂移以及基線噪音。


    基線漂移


    線漂移基線漂移是色譜工作者普遍遇到的問(wèn)題。一般說(shuō)來(lái),機(jī)器剛起動(dòng)時(shí),基線容易漂移,大概要30min的平衡時(shí)間,如果用了緩沖溶液、緩沖鹽,或者在低波長(zhǎng)下(220nm)平衡時(shí)間相對(duì)會(huì)比較長(zhǎng),仍然發(fā)現(xiàn)基線漂移,原因可能有以下幾種:


    1、柱溫波動(dòng)


    控制好柱子和流動(dòng)相的溫度,檢查是否有打開的窗戶或空調(diào)對(duì)著柱溫箱


    2、流通池被污染或有氣體


    用甲醇或其他強(qiáng)極性溶劑沖洗流通池(盡量斷開柱子)。如有需要,可以用1N的硝酸(不要用鹽酸)。


    3、紫外燈能量不足


    更換新的紫外燈


    4、流動(dòng)相污染、變質(zhì)或由低品質(zhì)溶劑配成。檢查流動(dòng)相的組成,使用高品質(zhì)的化學(xué)試劑及HPLC級(jí)的溶劑。


    基線噪音


    對(duì)于紫外檢測(cè)器,氘燈光源打開后要預(yù)熱30min以上,基線才能穩(wěn)定。噪聲是指與被測(cè)物無(wú)關(guān)的檢測(cè)器輸出信號(hào)的隨機(jī)擾動(dòng)變化,分短期噪聲和長(zhǎng)期噪聲兩種。


    基線噪音(規(guī)則的)


    產(chǎn)生基線噪音的原因有:在流動(dòng)相、檢測(cè)器或泵中有空氣;漏液;流動(dòng)相混合不完全;溫度影響(柱溫過(guò)高,檢測(cè)器未加熱);在同一條線上有其他電子設(shè)備;泵振動(dòng)。


    了避免基線噪音,在正式進(jìn)樣之前,需要對(duì)流動(dòng)相脫氣;沖洗系統(tǒng)以除去檢測(cè)器或泵中的空氣;檢查管路接頭是否松動(dòng);泵是否漏液;是否有鹽析出和不正常的噪音,如有必要,更換泵密封;用手搖動(dòng)使溶劑混合均勻或使用低粘度的溶劑減少差異或加上熱交換器;有其他電子設(shè)備時(shí)斷開LC、檢測(cè)器和記錄儀,檢查干擾是否來(lái)自于外部,加以更正;泵振動(dòng)時(shí)在系統(tǒng)中加入脈沖阻尼器。


    基線噪音(不規(guī)則的)


    (1)漏液:檢查接頭是否松動(dòng),泵是否漏液,是否有鹽析出和不正常的噪音。如有必要,更換密封,檢查流通池是否漏液。


    (2)流動(dòng)相污染、變質(zhì)或由低質(zhì)溶劑配成:檢查流動(dòng)相的組成。


    (3)流動(dòng)相各溶劑不相溶:選擇互溶的流動(dòng)相。


    (4)檢測(cè)器/記錄儀電子元件的問(wèn)題:斷開檢測(cè)器和記錄儀的電源,檢查并更正。


    (5)系統(tǒng)內(nèi)有氣泡:用強(qiáng)極性溶液清洗系統(tǒng);檢測(cè)器內(nèi)有氣泡,清洗檢測(cè)器,在檢測(cè)器后面安裝背景壓力調(diào)節(jié)器。


    (6)流通池污染(即使是極少的污染物也會(huì)產(chǎn)生噪音):用硝酸清洗流通池;


    (7)檢測(cè)器燈能量時(shí)不足更換燈;


    (8)色譜柱填料流失或阻塞:更換色譜柱。


    (9)流動(dòng)相混合不均勻或混合器工作不正常:維修或更換混合器,在流動(dòng)相不走梯度時(shí),不建議使用泵的混合裝置。


    高效液相色譜儀操作步驟如下:


    1)過(guò)濾流動(dòng)相,根據(jù)需要選擇不同的濾膜.


    2)對(duì)抽濾后的流動(dòng)相進(jìn)行超聲脫氣10-20分鐘。


    3)打開hplc工作站(包括計(jì)算機(jī)軟件和色譜儀),連接好流動(dòng)相管道,連接檢測(cè)系統(tǒng)。


    4)進(jìn)入hplc控制界面主菜單,點(diǎn)擊manual,進(jìn)入手動(dòng)菜單。


    5)有一段時(shí)間沒(méi)用,或者換了新的流動(dòng)相,需要先沖洗泵和進(jìn)樣閥。


    6)調(diào)節(jié)流量,初次使用新的流動(dòng)相,可以先試一下壓力,流速越大,壓力越大,一般不要超過(guò)2000。


    7)設(shè)計(jì)走樣方法。


    8)進(jìn)樣和進(jìn)樣后操作。


    9)關(guān)機(jī)時(shí),先關(guān)計(jì)算機(jī),再關(guān)液相色譜。


    10)填寫登記本,由負(fù)責(zé)人簽字。


    11)流動(dòng)相均需色譜純度,水用20m的去離子水。


    12)柱子是非常脆弱的,次做的方法,先不要讓液體過(guò)柱子。


    13)所有過(guò)柱子的液體均需嚴(yán)格的過(guò)濾。


    14)壓力不能太大,不要超過(guò)2000psi。


    高效液相色譜是色譜法的一個(gè)重要分支,以液體為流動(dòng)相,采用高壓輸液系統(tǒng),將具有不同極性的單一溶劑或不同比例的混合溶劑、緩沖液等流動(dòng)相泵入裝有固定相的色譜柱,在柱內(nèi)各成分被分離后,進(jìn)入檢測(cè)器進(jìn)行檢測(cè),從而實(shí)現(xiàn)對(duì)試樣的分析。


標(biāo)簽:                                    液相色譜儀

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